分光光度計原理是我們從事實驗室儀器研究和應用的人員需要掌握的知識。分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器。該儀器是實驗室、科研機構(gòu)、醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、食品廠、飲用水廠等機構(gòu)必備檢驗設備。已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。分光光度計基本原理是指采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關(guān)系如下式：

　　A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc

　　式中 ：

　　A 為吸光度;

　　I。為入射的單色光強度;

　　I 為透射的單色光強度;

　　T 為物質(zhì)的透射率;

　　k 為摩爾吸收系數(shù);

　　L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長;

　　c 為物質(zhì)的濃度。

　　物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作。